El óxido nítrico en el condensado de aire exhalado de voluntarios sanos recogidas con un dispositivo reutilizable Archivos de Bronconeumología (edición Inglés) anoxia cerebral

Fondo

El análisis de condensado de aire exhalado (EBC) es una técnica no invasiva que permite la determinación de otras sustancias volátiles y no volátiles producidos en el tracto respiratorio, cuya medición puede ser útil para el diagnóstico y seguimiento de varias enfermedades respiratorias. Objetivo

El objetivo de este estudio fue producir un dispositivo reutilizable de bajo coste con el fin de muestrear el condensado de aire exhalado en voluntarios adultos sanos, y para determinar la concentración de óxido nítrico en la muestra recogida. material y métodos

El aparato se hizo con un tubo en forma de U de vidrio de borosilicato.


El tubo se coloca en un recipiente con hielo, y las válvulas unidireccionales respiratorias se ajusta al extremo distal.anoxia cerebral después, el óxido nítrico se midió en el condensado de aire exhalado (EBC) por quimioluminiscencia. resultados

El costo total del dispositivo era de $ 120.20. muestras de EBC se obtuvieron de 116 voluntarios de ambos sexos, con edades comprendidas entre 20 y 70. El volumen medio de condensado de aire exhalado recogido durante 10 minutos fue de 1,0 ± 0,6 ml, y el nivel medio de óxido nítrico fue 12,99 ± 14,38 m (mediana 8,72 micras ). No hubo correlación entre los niveles de óxido nítrico en el condensado de aire exhalado y la edad o el sexo. Conclusión

Se demuestra que es posible fabricar un bajo costo, eficiente, dispositivo reutilizable con el fin de recoger y determinar los niveles de óxido nítrico en EBC. Hemos identificado ninguna correlación entre los niveles de óxido nítrico presente en la EBC obtenidos con este método, ya sea con la edad o anoxia sex.Cerebral

Fundamento

El análisis del Condensado de aire espirado (o exhalado) Es Una técnica no cruenta Que permite determinar S. Diversas sustancias sustancias volátiles y sin sustancias volátiles producidas en las vias respiratorias, y Cuya Medición Puede Ser Útil Para El diagnostico y La Supervisión de Diversas Enfermedades Respiratorias. Objetivos

El objetivo m del Presente Estudio FUE Producir ONU reutilizable Dispositivo, de bajo coste, párrafo Obtener Muestras del Condensado de aire espirado en individuals Voluntarios Sanos y determinar S. La Concentración de óxido nítrico en la Muestra recolectada. Métodos y materiales

El Dispositivo se Fabrico Con Un tubo de vidrio de borosilicato en forma de U. El tubo se introdujo en la ONU Recipiente con hielo y en el Extremo distal se adaptaron Válvulas unidireccionales respiratorias.anoxia cerebral Seguido acto, se determinó el óxido nítrico en el aire espirado de Condensado (CAE) MEDIANTE UN Método de quimioluminiscencia. Resultados

El coste total del Dispositivo del FUE de 120,20 Dólares. Las Muestras de CAE se obtuvieron A partir de 116 individuals de Ambos Sexos, de 20-70 años de Edad. El volumen medio del Condensado de aire espirado obtenido Durante 10 min FUE de 1,0 ± 0,6 ml y el nivel medio del óxido nítrico FUE de 12,99 ± 14,38 m (mediana, 8,72 m). Sin Hubo Correlación Entre los Niveles de óxido nítrico en el aire espirado de Condensado y La Edad o el sexo. Conclusión

Demostramos Que Es Posible Fabricar ONU Dispositivo de bajo coste, Eficiente y reutilizable, para determinar S. Obtener y los Niveles de óxido nítrico en el CAE.Cerebral anoxia TAMPOCO HEMOS IDENTIFICADO Una Correlación Entre los Valores de óxido nítrico Presente En El CAE obtenido un Través de Este Método, La Edad y el sexo.

Introducción

El análisis de biomarcadores en exhalado condensado de aire (EBC) se ha propuesto como una técnica no invasiva para la investigación de varias enfermedades respiratorias inflamatorias y no inflamatorias y como una herramienta para el seguimiento de estas enfermedades. 1-4 entre los biomarcadores de interés, el óxido nítrico (NO), un radical libre que participa en una amplia variedad de reacciones bioquímicas pertinentes, ha surgido como un importante marcador biológico. 5-8 exhalado NO ha sido intensamente investigado y parece ser un marcador útil en el asma 9 y enfermedad pulmonar obstructiva crónica (EPOC). 10 sus valores también han demostrado ser mayor en pacientes con cáncer de pulmón y 11 se pueden correlacionar con las puntuaciones de lesión pulmonar clínicos. 12

anoxia cerebral

A pesar del hecho de que los dispositivos de recogida de EBC son comercialmente disponibles, estos dispositivos son desechables y en muchos países que no están fácilmente disponibles, especialmente en los países en desarrollo, donde los costos de importación limitan su uso sistemático en la práctica clínica. Por otra parte, casi no se dispone de información acerca del contenido de NO en el CAE de individuos sanos. Algunos estudios proporcionan los valores de la concentración media en individuos sanos (Tabla 1), y la variabilidad de los valores pueden deberse a los diferentes tipos de dispositivos utilizados.

Por esta razón, con el fin de resolver estas dificultades, decidimos fabricar el instrumento propuesto por Horváth et al. 13 en nuestra institución con algunas modificaciones con el fin de obtener y analizar NO en el CAE de una cohorte de métodos anoxia adults.Cerebral saludables

El presente estudio fue aprobado por el comité de investigación de nuestra institución (HCRP protocolo número 4167/2009). Todos los experimentos se realizaron de acuerdo con los principios éticos de la investigación médica humana (Asociación Médica Mundial, Declaración de Helsinki). Los voluntarios

Se reclutaron 116 voluntarios sanos, tanto hombres como mujeres, con edades de 20 a 70. Los pacientes fueron asignados a los grupos de edad que fueron estratificados por incrementos de 10 años. Quedan excluidos del estudio fueron los voluntarios que tenían una historia de cualquiera de tabaquismo, drogadicción, enfermedades pulmonares y / o enfermedad sistémica crónica, incluyendo alergias, infecciones respiratorias agudas en los últimos 30 días, reciente y / o la constante exposición al formaldehído y el ozono, y el uso de ciertos fármacos, tales como inhibidores de enzima convertidora de angiotensina, inhibidores de fosfodiesterasa, no drogas donantes (nitroprusiato), esteroides, oximetazolina y fármacos anti-inflamatorios no esteroideos.anoxia cerebral también excluyó cualquier individuo que había comido dentro de 2 h antes de la recogida de EBC o que habían hecho ningún ejercicio físico extenuante, consumido alcohol o tomado ningún medicamento en el anterior 24 h. Dispositivo para la recogida de condensado de aire exhalado

En resumen, el dispositivo se hizo con un tubo en forma de U de vidrio (vidrio de borosilicato, Duran Schott-Rohrglas ®, Mitterteich, Alemania) que fue de 18 mm de espesor. En el extremo distal inferior del tubo de vidrio, una abertura se hizo que estaba conectado a un tubo de polipropileno (1,5 ml de capacidad, inc Axygen., California, EE.UU.) para la recogida de EBC. En el otro extremo abierto del tubo, se conectaron válvulas respiratorias unidireccionales (K Takaoka, Sao Paulo, Brasil), que separa el aire inhalado (habitación) desde el aire exhalado con el fin de dirigir todo el aire espirado a través de la anoxia tube.Cerebral a neumotacómetro digital (ventronic II, atención sanitaria DHD, nueva York, EE.UU.) se conecta al extremo opuesto. La Fig. 1 muestra el diseño y las dimensiones del tubo de vidrio, así como el conjunto de recogida de EBC.

Después de cada uso, las piezas de teflón y de silicona se limpiaron con agua y jabón y se colocaron en un recipiente con ácido peracético (Anioxyde 1000, Anios, PAVE du Moulin, Lille, Francia) a una concentración de 1471 partes por millón por 30 min. Acto seguido, se aclararon en agua y se secan. El tubo de vidrio se enjuagó con agua destilada abundante (Milli-Q) y se esteriliza por autoclave (HI VAC, Baumer, Sao Paulo, Brasil). La obtención de condensado de aire exhalado

Se dieron instrucciones a todos los voluntarios para explicar los pasos necesarios, que se repitieron con un dispositivo similar antes de obtener EBC.Cerebral anoxia justo antes de la maniobra de EBC, los individuos enjuagaron sus bocas con agua destilada. Utilizando una pinza en la nariz, los individuos fueron instruidos para respirar con calma a través de la boca del dispositivo durante 10 min. Durante todo el procedimiento, la totalidad del tubo de vidrio, así como vial de recogida se mantienen cubiertas con hielo picado mezclado con la sal a una temperatura de -10 ° C, que se controló constantemente con un termómetro digital (Minipa, MVP363, China). Almacenamiento y preparación del condensado de aire exhalado

Los viales del condensado de aire obtenido se mantuvieron en hielo y rápidamente transportados a un congelador, en el que se mantuvieron a -70 ° C para su posterior análisis. Para el análisis, la EBC de cada individuo fue desproteinizado con etanol puro (4 ° C) durante 30 min, y justo después de que se almacenaron en el congelador durante 30 min (-20 ° C) .Cerebral anoxia después de este período, eran se centrifugaron a 4000 rpm durante 10 min utilizando una centrífuga refrigerada. Evaluación del NO

El NO en el EBC se determinó por medio de quimioluminiscencia. 4,14 brevemente, la detección de NO se basa en la observación de la reacción del ozono con NO, que produce NO 2 y, cuando estable, puede ser medido por quimioluminiscencia, ya que emite una radiación de luz que es proporcional a la concentración de NO en el aire exhalado. La luminiscencia generada se determinó con un tubo fotomultiplicador sensible y es directamente proporcional a los valores de NO. El análisis se realiza en el analizador de óxido nítrico, 280i NOA (Sievers, Boulder, CO, EE.UU.). análisis estadístico

Con el fin de verificar la distribución de los datos, se utilizó la prueba de Shapiro-Wilk y gráficos de Q-Q.anoxia cerebral los resultados se presentan como media ± desviación estándar y / o medianas y cuartiles. Para las comparaciones, se utilizaron el Mann-Whitney U y las pruebas de Kruskal-Wallis. Una estimación de la curva se realizó utilizando un procedimiento de regresión con el fin de verificar la relación entre las variables. Todos los procedimientos estadísticos se realizaron con el software SPSS, versión 15.0. resultados

La Tabla 2 muestra las variables demográficas. No se observaron efectos adversos se produjo durante o después del procedimiento de recogida de EBC. El coste total del dispositivo, incluyendo el tubo de vidrio y las válvulas unidireccionales respiratorias fue de $ 120,20 ($ 56.68 y $ 63,52, respectivamente).

Discusión

Hay pruebas de que muestra el importante papel desempeñado por el NO en la fisiopatología de diferentes enfermedades respiratorias, tales como el síndrome de distrés respiratorio agudo (ARDS), enfermedad pulmonar obstructiva crónica (EPOC), fibrosis quística (CF), asma, hipertensión pulmonar (PH) , bronquiectasia, disfunción mucociliar primaria, enfermedad pulmonar intersticial y otras enfermedades de las vías respiratorias. 5,7 estudios publicados han documentado que los pacientes de asma tienen mayores niveles de NO en el aire exhalado 15,16 y los niveles de nitrito en EBC, en comparación con los individuos sanos; Esto es posiblemente debido a la presencia de un estado inflamatorio. 17 monitoreo de las concentraciones de NO en el aire exhalado es un marcador emergente de la inflamación de eosinófilos en el asma que hace que sea más fácil de diagnosticar, supervisar la progresión de la enfermedad y evaluar la respuesta al tratamiento. 18

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En los pacientes con EPOC, se observaron niveles significativamente más altos de NO exhalado en comparación con los fumadores y los no fumadores de salud. 19 pero, los estudios también han demostrado que los niveles de metabolitos de NO (NOx) en la EBC de ex fumadores con EPOC son más bajos que en los individuos sanos, no fumadores y exfumadores. 17,19

NO en el aire exhalado de los seres humanos disminuye significativamente después de la cirugía cardíaca. Esto puede ser una consecuencia de una reducción de la producción endógena de NO debido a una lesión endotelial vascular pulmonar. 20 esta reducción de la producción de NO exhalado puede estar asociado con cambios en la función mecánica respiratoria durante la hipoxia. Sin embargo, se ha documentado que los niveles de NO son todavía bajos después de la re-oxigenación, que posiblemente puede indicar una lesión epitelial bronquial. 21 En consecuencia, EBC también se puede utilizar para la supervisión y el estudio de las enfermedades respiratorias y para evaluar la efectividad del tratamiento. 15,19

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En el presente estudio, hemos demostrado que el dispositivo se construyó es reutilizable y eficaz para recoger EBC ya un precio razonable. El volumen de EBC que hemos sido capaces de recoger fue suficiente para evaluar y determinar NO, y creemos que es suficiente para el análisis de otros biomarcadores. Además, con esta metodología se ha determinado el contenido de NO en el CAE de individuos sanos y hemos demostrado que los niveles de NO en el CAE de individuos sanos no se correlacionan con la edad y / o sexo.

Similar a los resultados del presente estudio, Cruz et al. 1 no identificó una correlación entre la edad y la concentración de NO en EBC.

El contenido de NO se detectó en EBC es similar a la descrita por Ojoo et al., 22 Liu et al. 23 y Hoffmeyer et al., 24 aunque mayor que los valores reportados por ganas et al., 25 Franklin et al. 26 y Dressel et al. 27, sin duda, las diferencias entre los dispositivos y determinación de NO son responsables de esta anoxia variability.Cerebral Además, es necesario tener en cuenta que la mayor parte de esta investigación utilizó muestras a pequeña escala.

Hasta la fecha, no hay suficiente evidencia sobre la correlación entre el contenido de NO en el CAE y la edad y / o sexo. Como consecuencia, la American Thoracic Society / European Respiratory Society (ATS / ERS) 28 han recomendado teniendo en cuenta tanto la edad, así como el sexo como factores que pueden afectar la concentración de los biomarcadores en EBC. Por esta razón, consideramos que el presente estudio hace una contribución hacia la respuesta a estas preguntas: como en otros estudios, 1 en la presente investigación no hemos encontrado una correlación entre la edad o el sexo y la concentración de NO en el CAE.

Otro motivo de preocupación es la influencia de los parámetros ventilatorios en EBC y su anoxia content.Cerebral la correlación encontrada entre el volumen minuto y el volumen de EBC se recogió como se había previsto, como han informado de otros investigadores. Liu et al. 29 lo encontraron la misma correlación y sugirió que el volumen minuto y el volumen corriente se predecir el volumen de EBC. También observaron que el sexo y la edad no produjo un efecto significativo en el volumen de EBC. Montuschi 4 también documentó que el volumen EBC es directamente proporcional al momento en el que se obtiene y la frecuencia respiratoria de aire exhalado. Además, franklin et al. 26 han demostrado que el flujo respiratorio no influye en el contenido de NO en el CAE de los adultos sanos. Este factor también merece la atención de los investigadores, de acuerdo con los resúmenes publicados de un seminario organizado por el ATS. 28

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Otro problema que merece atención es el momento de la recogida de condensados. Una colección tomada a lo largo de 10 min producidos volumen suficiente para el análisis de NO, y probablemente otros marcadores. Tiempos más largos se traducirían en mayores volúmenes, como lema et al. 30 obtienen 1,5 ml después de 15 min, y Vaughan et al. 31 observaron que el aumento en el tiempo de recogida aumenta el volumen obtenido. Optamos por un período de 10 min, ya que es bien tolerada y se traduce en un volumen medio de 1-2 ml, de acuerdo con las recomendaciones de los resúmenes publicados partir del Seminario organizado por el ATS. Además, es necesario verificar la influencia potencial de la temperatura durante la recogida y almacenamiento, así como para verificar cualquier influencia del material utilizado en la fabricación del dispositivo.anoxia cerebral

Se necesitan más estudios no sólo para ser utilizado como una referencia para los diferentes marcadores biológicos, sino también para determinar si un análisis secuencial podría ser útil para el seguimiento de la enfermedad en cuestión. 32

Otro factor preocupante es el material utilizado en cada dispositivo. El ECOSCREEN ® y Rtube ® dispositivos están hechos con teflón y aluminio, 19, respectivamente, aunque los dispositivos manufacturados se hacen generalmente con el vidrio revestido con silicona. 13,33 consideramos que vidrio de borosilicato, aunque más frágil, es menos costoso y también inerte, lo que reduce la probabilidad de influir en el marcador que se analiza. Liu et al. 23 compararon la ECOSCREEN ® y Rtube ® dispositivos con dispositivos hechos de vidrio revestida de silicona, pero las diferencias no fueron significativas en comparación con el vidrio no recubierto.anoxia cerebral soyer et al. 34 también obtenidos mayores volúmenes EBC utilizando el ECOSCREEN ® dispositivo compararon con Rtube ® mientras tanto, rosias et al. 35 encontraron que los dispositivos fabricados con vidrio de borosilicato, si recubierto o no con silicona, fueron más efectivos para la determinación de 8-isoprostano y albúmina en comparación con los realizados con aluminio y teflón. Se formuló la teoría de que el vidrio tiene propiedades menos adhesivo, lo que significa un mayor número de moléculas que se encuentran en el EBC.

Por lo tanto, parece que los diferentes dispositivos pueden proporcionar resultados diferentes para el mismo marcador biológico, y un consenso no se ha alcanzado en el diseño y los materiales más apropiados para cada biomarcador. Por lo tanto, son necesarios estudios adicionales con el fin de definir que el diseño y el material son mejores para un biomarcador específico de interés en la EBC.anoxia cerebral También, se necesita más investigación no sólo para evaluar los parámetros de referencia de los diferentes marcadores biológicos, sino también para determinar si un análisis secuencial puede ser útil para el seguimiento de una determinada enfermedad. 32

En conclusión, hemos fabricado un dispositivo reutilizable que es eficaz para la obtención de EBC y para la evaluación de su contenido NO. Además, se ha determinado el contenido de NO en el CAE de voluntarios sanos y hemos demostrado que, utilizando esta metodología, el contenido de NO no se correlaciona con la edad o el sexo. Fondos

El presente trabajo de investigación recibió fondos de la fundación para apoyar la enseñanza y la investigación (FAEPA) y el Consejo Nacional de Desarrollo Científico y Tecnológico (CNPq) de Brasil.anoxia cerebral conflicto de intereses

Los autores declaran no tener ningún conflicto de intereses.