El supresor de tumores p53 induce apoptosis en respuesta a una lesión cerebral genotóxica y anóxica después de un paro cardíaco

El supresor de tumores p53 induce apoptosis en respuesta a tensiones genotóxicas y ambientales. A la exclusión nuclear. Abrir en otra ventana. La localización celular de la longitud completa de p53 y sus propias células mutantsmcf-7 de deleción se han transfectado con construcciones p53 de pronóstico de lesión cerebral axonal difusa para sobreexpresar la duración completa de p53 o sus dominios de deleción mutantes (A). de p53-dsred2 la longitud completa o la eliminación de dominios mutantes (B) inmunoblotting evaluación para p53 y sus propios mutantes. (C) Las células transfectadas con p53-dsred2 marcadas con anti-mthsp70 se habían visualizado con un microscopio confocal MK-8033. (D) el coeficiente de superposición de mander entre sus diferentes construcciones de p53 y mthsp70 como se establece en la fig. 1 D. (E) fracción pequeña celular se adquirió como se menciona en la fig. 1 E.


El sitio dnaj de tid1 es necesario para la discusión de los dominios N y C del terminal de p53. A continuación, establecimos condiciones anóxicas cuyos dominios de tid1 MK-8033 y p53 habían sido policlonales de conejo a BL-CAM necesarios para su discusión. Las muchas construcciones de pegfp-tid1 se habían transfectado en células MCF-7 para crear exógenamente este pronóstico después de las proteínas mutantes tid1 de la lesión cerebral anóxica. Los lisados ​​de proteínas se utilizaron posteriormente para la inmunoprecipitación con un anticuerpo policlonal de conejo anti-GFP, un anticuerpo policlonal anti-p53 o un igg regular de conejo y proteínas de perlas de agarosa A / G. Estos ejemplos fueron después de la inmunotransferencia con un anticuerpo monoclonal anti-GFP. Una falta consecutiva de los dominios C no terminales homólogos, ricos en Cys y ricos en G / F que comienzan con antonyme ansiété el extremo C-terminal de tid1 no pareció obstaculizar la discusión entre tid1 y p53 endógena. Aunque el mutante tid189-447 MK-8033 se localizó mal en la célula (fig.? (Fig. 1C), 1C), incluso ahora detectamos una interacción relativamente sólida entre este mutante y p53 (fig.? (Fig. 3A). 3A). El exceso de falta de la anoxia cerebral dnaj causa el sitio a través del extremo N-terminal de tid1, lo que condujo a la anulación de la discusión tid1 / p53 (fig.? (Fig.3A) .3A). Por lo tanto, las eliminaciones de sitios consecutivas de cualquiera de los extremos de las proteínas tid1 poseen, por ejemplo, la necesidad del sitio dnaj para la formación de este complejo de proteínas. Abra en otra ventana el sitio 3 dnaj de tid1 y el sitio N-terminal y C-terminal de p53 son esenciales para su discusión. (A) tipo salvaje o las diversas construcciones mutantes tid1-EGFP se introdujeron en células MCF-7 (p53wt) Por lipofectamine2000 transfección. Las células se habían lisado, se habían inmunoprecipitado con los anticuerpos indicados y se habían inmunotransferido con una fisiopatología de la lesión cerebral isquémica anti-GFP neuropatología y mecanismos de anticuerpos. Se utilizó igg de conejo como el control adverso (B) de tipo salvaje o MK-8033, las diversas construcciones mutantes p53-dsred2 se habían presentado en células MCF-7 (p53wt). Las células se habían lisado, se habían inmunoprecipitado utilizando los anticuerpos indicados y se habían sometido a inmunotransferencia con anticuerpos anti-p53. Ratón igg fue utilizado como el control perjudicial. (C) Evaluación de inmunotransferencia de p53 y sus propios mutantes con anticuerpos anti-p53. Para buscar la región de conexiones plexo ansiedad testimonios en p53, pdsred2-p53 construcciones habían sido transfectadas en células MCF-7, así como las proteínas lisados ​​se emplearon para inmunoprecipitación utilizando el anticuerpo monoclonal dsred2, anticuerpo monoclonal anti-tid1, o ratón normal igg y proteínas A / G-agarosa (fig.? (fig.3B) .3B). Los inmunoprecipitados habían sido después de esa definición médica de anoxia inmunotransferidos con anticuerpo anti-p53 (FL393) (fig.? (Fig. 3C) .3C). Se han descubierto todos los tipos silvestres p53 exógenos y los mutantes (fig.? (Fig.3B) .3B). Aunque aún no se había determinado si los dominios de transactivación son necesarios para las conexiones, estos datos demostraron que los dominios N-terminales o el área C-terminal de p53 eran suficientes para que p53 mantuviera las conexiones con tid1. Tid1 straight interactúa con p53 para ver si estas proteínas interactúan directamente o si otras proteínas se mezclan en complejo, utilizamos la estrategia occidental tradicional. Como la eliminación consecutiva de los dominios C-terminal, rica en cys y rica en G / F en el extremo C-terminal de tid1, los síntomas de ataque de ansiedad en mujeres no parecen obstaculizar las conexiones entre los síntomas de convulsión anóxica tid1 y p53 endógeno ( fig. (fig.3A), 3A), nos centramos en los dominios eliminados en el N-terminal. La proteína mutante tid1 marcada con His (fig.? (Fig.4A) 4A) se purificó. Sin embargo, no pudimos crear una proteína purificada para tid1 de duración completa o cualquier mutante tid1 que tenga los dominios N-terminales, independientemente de muchas iniciativas para optimizar la expresión de proteínas. No es sorprendente que en realidad pudiéramos tener el mutante de eliminación del dominio N-terminal tid199-447, que se demostró a través de nuestra co-inmunoprecipitación para conectarse a p53. Las proteínas purificadas etiquetadas por el virus habían sido ataques severos de ansiedad en perros que se resolvieron sobre la membrana para utilizarlas como proteínas víctimas. La membrana se limpió e incubó utilizando las proteínas p53 etiquetadas con GST N-terminales purificadas como cebo, acompañadas de un anticuerpo anti-GST para identificar la presencia actual de la unión del cebo. Mientras que tid199-447 estaba destinado a GST-p53, no se unía.